1、溫度

　　利用溫度進行滅菌、消毒或防腐，是zui常用而又方便有效的方法。高溫可（kě）使微（wēi）生物細胞內的蛋白質和酶（méi）類發生變性而失活（huó），從而起滅菌作用，低溫通常起抑菌作用。

１）幹熱滅菌法:

　　a.灼燒滅菌法：利用火焰直接把微生物燒死。此法可靠，滅菌迅（xùn）速，但易焚毀物（wù）品，所以（yǐ）使用範（fàn）圍有限，隻適合於接種針、環、試（shì）管口（kǒu）及不能用的汙染物品或實驗動物的屍體等的（de）滅菌。

b.幹熱空氣滅菌法：這是實驗室（shì）中常（cháng）用的一種方法，即把（bǎ）待滅菌的物品均勻地（dì）放入烘箱中，升溫至（zhì）160°C，恒溫1小（xiǎo）時（shí）即可。

２）濕熱滅（miè）菌法:

　　在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比幹熱滅菌（jun1）好，這是因為一方（fāng）麵細胞內蛋白質含水量高，容易變性。另（lìng）一方麵（miàn）高溫水蒸汽對蛋（dàn）白質有高（gāo）度的穿透力，從而加速蛋白質變性而迅速死亡。

a.巴氏消（xiāo）毒法：有些食物會（huì）因高（gāo）溫破壞營養成分或影響質量，如牛奶、醬油、啤酒等，所以隻能用較低的溫度來殺死（sǐ）其中的病原微生（shēng）物，這樣既保持食物的營養（yǎng）和風味，又進行（háng）了消毒，保證了食品衛生。該法一般在62°C，30分鍾既可達到（dào）消毒目的。

　　b.煮沸消毒法：直接將要消毒的物品放入清水中，煮沸15分鍾，即（jí）可殺死細（xì）菌的全部營養和部分（fèn）芽孢。若在清水中加（jiā）入1%碳酸鈉或2%的石炭酸，則效果更（gèng）好。此法適（shì）用於注射器、毛巾及解剖用具的消毒。

　　c.間歇（xiē）滅菌法：上（shàng）述兩種（zhǒng）方法在常壓下，隻能起（qǐ）到消毒作用，而很難做到（dào）*無菌。若（ruò）采用間歇滅（miè）菌的方法，就能殺滅物品中所有的微生物。具體做法是：將待滅菌的（de）物品加熱至100°C，15~30分鍾，殺死其中的營（yíng）養體。然後冷卻，放入37°C恒溫箱中過夜，讓殘留（liú）的芽孢萌發成營養體。第2天再重複上述步驟（zhòu），三次左右，就可達到滅菌的目的。此法不需加壓滅菌鍋，適於（yú）推廣，但操作麻煩，所需時間長。

　　d.加（jiā）壓蒸汽滅菌法（fǎ）：這是發酵（jiào）工業、醫療保健（jiàn）、食品（pǐn）檢測和（hé）微生物學實驗室中zui常用的一種滅菌（jun1）方法。它適用於各種耐熱、體積大的培養基的滅菌，也適（shì）用於玻璃器皿、工作服等（děng）物（wù）品的滅（miè）菌。

　　加壓蒸汽滅菌是把待（dài）滅菌的物品放在（zài）一個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進行的，以（yǐ）大量蒸汽使其中壓力升高。由（yóu）於蒸汽壓的上升（shēng），水的沸點也隨之提高（gāo）。在蒸汽壓達到（dào）1.055公斤/厘米（mǐ）2時，加壓蒸汽滅菌（jun1）鍋內的溫度可達（dá）到121°C。在這種情況（kuàng）下，微生物（包（bāo）括芽（yá）孢）在15~20分鍾便會被殺死，而（ér）達到滅菌目的。如滅菌的對象是砂土、石蠟油等麵積大、含菌多、傳熱差的物品，則應適當延長滅菌時間。

　　在（zài）加壓蒸汽滅（miè）菌（jun1）中（zhōng），要引起注意的一個問題是，在恒壓之前，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對應關係，這樣會大大降（jiàng）低滅菌效果。

３）影響（xiǎng）滅菌的因素

　　a.不同的（de）微生物或同種微生物的不同菌（jun1）齡對高溫的敏感性不同。多數（shù）微生物的營養體和病毒在50~65°C，10分鍾就會被殺死（sǐ）；但（dàn）各種孢子、特別是芽孢zui能抗熱，其中抗熱性zui強的是嗜熱脂肪（fáng）芽孢杆菌，要在121°C，12分鍾（zhōng）才被殺死。對同種微（wēi）生物來講，幼齡菌比老齡菌對熱更敏感。

　　b.微生物的數量多少顯（xiǎn）然會影響（xiǎng）滅（miè）菌的效果，數量越多，熱死時間越長。

　　c.培養基的成分與組成也會影響滅菌效果。一般地講，蛋白質、糖或脂肪存（cún）在，則提高抗熱性，pH在7附近，抗熱性zui強，偏向兩極，則抗熱能力下降，而不同的鹽類可能對滅菌產（chǎn）生不同的（de）影響；固體培養基要比液體培養基滅菌時間長。

４）滅菌對培養基成分的影響

　　a.pH值普遍下降。

　　b.產（chǎn）生混濁或沉澱，這（zhè）主要是由於一些離子發（fā）生化學（xué）反應而產生混濁或沉澱。例如Ca+2與（yǔ）PO4-3化合，就會（huì）產生磷酸鈣沉澱。

　　c.不少培（péi）養基顏色加深。

　　d.體積和濃度有所變化。

　　e.營養成分有時受到破壞。

２、輻射

　　利用輻射進行滅菌消毒，可以避免高溫滅菌或化學藥劑消毒的缺點，所以（yǐ）應用越來（lái）越廣，目前主要應用在以下幾個方麵：

　　１）接種室、手術室（shì）、食品、藥物包裝室常應用紫外線殺（shā）菌。

　　２）應用β射線作食品表（biǎo）麵殺菌（jun1），γ射線用（yòng）於食品（pǐn）內部殺菌。經輻射後的食品，因大（dà）量微生（shēng）物被殺滅，再用冷凍保藏，可使保存期（qī）延長。

３、過濾

　　采用機械方法，設計（jì）一（yī）種濾孔比細菌還小的篩子，做成各種（zhǒng）過（guò）濾器（qì）。通過（guò）過濾（lǜ），隻讓液體培養基從篩子中流（liú）下，而把各種微生物菌體留在篩子上麵，從而達到除菌的（de）目的。這（zhè）種滅菌方法適用於一些對熱（rè）不穩定的體積小（xiǎo）的液體培養基的滅菌以及氣（qì）體的滅菌。它的zui大優點是不破壞培養基中各種物質的（de）化學成分。但是比細菌還小的病毒仍然能（néng）留在液體培養基內，有（yǒu）時（shí）會給實驗帶來一定的麻煩。